<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE article PUBLIC "-//NLM//DTD JATS (Z39.96) Journal Publishing DTD v1.3 20210610//EN" "JATS-journalpublishing1-3.dtd">
<article article-type="research-article" dtd-version="1.3" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" xml:lang="ru"><front><journal-meta><journal-id journal-id-type="publisher-id">aids</journal-id><journal-title-group><journal-title xml:lang="ru">ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии</journal-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>HIV Infection and Immunosuppressive Disorders</trans-title></trans-title-group></journal-title-group><issn pub-type="ppub">2077-9828</issn><publisher><publisher-name>Baltic Medical Education Center</publisher-name></publisher></journal-meta><article-meta><article-id pub-id-type="doi">10.22328/2077-9828-2019-11-2-</article-id><article-id custom-type="elpub" pub-id-type="custom">aids-418</article-id><article-categories><subj-group subj-group-type="heading"><subject>Research Article</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="section-heading" xml:lang="ru"><subject>Статьи</subject></subj-group></article-categories><title-group><article-title>Показатели качества спермы у мужчин с ВИЧ-инфекцией</article-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title></trans-title></trans-title-group></title-group><contrib-group><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Селимова</surname><given-names>Фатима Насрединовна</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>Врач-акушер-гинеколог, научный сотрудник</p></bio><email xlink:type="simple">doc.fselimova@mail.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib></contrib-group><aff xml:lang="ru" id="aff-1"><institution>Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" МЗ РФ</institution><country>Russian Federation</country></aff><pub-date pub-type="collection"><year>2019</year></pub-date><pub-date pub-type="epub"><day>19</day><month>06</month><year>2019</year></pub-date><volume>11</volume><issue>2</issue><elocation-id>418</elocation-id><permissions><copyright-statement>Copyright &amp;#x00A9; Селимова Ф.Н., 2019</copyright-statement><copyright-year>2019</copyright-year><copyright-holder xml:lang="ru">Селимова Ф.Н.</copyright-holder><copyright-holder xml:lang="en">Селимова Ф.Н.</copyright-holder><license xml:lang="ru" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.</license-p></license><license xml:lang="en" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.</license-p></license></permissions><self-uri xlink:href="https://hiv.bmoc-spb.ru/jour/article/view/418">https://hiv.bmoc-spb.ru/jour/article/view/418</self-uri><abstract><p>        Цель исследования: оценить влияние антиретровирусной терапии (АРВТ) на показатели спермограммы у мужчин, инфицированных ВИЧ.</p><sec><title>Материал и методы</title><p>Материал и методы: Проведено проспективное исследование случай-контроль у 66 мужчин с ВИЧ-инфекцией, которые обратились для оценки фертильности.  1 группу исследования составили 51 мужчина, принимающий АРВТ; 2 группу – 15  мужчин, не получавших АРВТ. Проведена оценка 97 и 25 образцов спермы соответственно.  Статус пациентов по ВИЧ-инфекции оценивали на основании данных о стадии и фазе заболевания, уровне вирусной нагрузки, CD3+, CD4+ , CD8+ лимфоцитов и длительности АРВТ.</p></sec><sec><title>Результаты исследования</title><p>Результаты исследования: В 1 группе «стаж» ВИЧ-инфекции на момент включения в исследование был статистически значимо выше, чем во 2 группе   – 5 лет (2-9 лет) и 2,5 года (0,4-4,5), соответственно, (р=0,0004). Медиана продолжительности приема препаратов в 1 группе составила 1,5 года. В группе пациентов, принимающих АРВТ, в структуре патозооспермии преобладала тератозооспермия (40%), доля патологических форм сперматозоидов в данной группе было статистически значимо выше по сравнению со 2 группой (97 (96 -98) и 96 (94,5-96,5); р=0,006). В 1 группе пациентов установлена отрицательная взаимосвязь числа аномальных сперматозоидов и уровня CD4+ лимфоцитов (r=-0,362;р=0,026), длительностью заболевания (r=0,173;р=0,173) и концентрацией сперматозоидов (r=-0,242;р=0,020), числом прогрессивно–подвижных форм категории «в» (r=-0,241;р=0,024). Длительность АРВТ отрицательно коррелировала с числом прогрессивно–подвижных сперматозоидов категории «в» (r=-0,224;р=0,036).</p><p>Во 2 группе пациентов была выявлена статистически значимая положительная взаимосвязь между уровнем СД4+ лимфоцитов, объемом эякулята (r=0,778;p=0,014) и количеством прогрессивно–подвижных сперматозоидов категории «в»  (r=0,667;р=0,05). Также была обнаружена статистически значимая отрицательная взаимосвязь уровня вирусной нагрузки и объема эякулята (r =-0,669;р=0,035).</p><p>При оценке процента фрагментации ДНК сперматозоидов было выявлено, что данный показатель был выше у ВИЧ – инфицированных пациентов, принимающих АРВТ по сравнению с ВИЧ – положительными мужчинами, не использовавших терапию (15,8 % (12,4-23) и 14% (10,9-20,5); р=0,533).соответственно.</p><p>   Таким образом, у ВИЧ–инфицированных пациентов, принимающих АРВТ, наблюдается патозооспермия, а именно увеличивается число патологических форм сперматозоидов, снижается их подвижность и  повышается фрагментация ДНК сперматозоидов. Доля аномальных форм сперматозоидов выше при низких показателях СD4+ лимфоцитов. Концентрация сперматозоидов снижается, а количество их неподвижных форм увеличивается при длительном «стаже» ВИЧ-инфекции. У ВИЧ-положительных пациентов, не использующих АРВТ, при высоких уровнях вирусной нагрузки снижается объем эякулята и этот же параметр возрастает при увеличении уровня CD4+ лимфоцитов.</p></sec></abstract><trans-abstract xml:lang="en"><p>        Цель исследования: оценить влияние антиретровирусной терапии (АРВТ) на показатели спермограммы у мужчин, инфицированных ВИЧ.</p><sec><title>Материал и методы</title><p>Материал и методы: Проведено проспективное исследование случай-контроль у 66 мужчин с ВИЧ-инфекцией, которые обратились для оценки фертильности.  1 группу исследования составили 51 мужчина, принимающий АРВТ; 2 группу – 15  мужчин, не получавших АРВТ. Проведена оценка 97 и 25 образцов спермы соответственно.  Статус пациентов по ВИЧ-инфекции оценивали на основании данных о стадии и фазе заболевания, уровне вирусной нагрузки, CD3+, CD4+ , CD8+ лимфоцитов и длительности АРВТ.</p></sec><sec><title>Результаты исследования</title><p>Результаты исследования: В 1 группе «стаж» ВИЧ-инфекции на момент включения в исследование был статистически значимо выше, чем во 2 группе   – 5 лет (2-9 лет) и 2,5 года (0,4-4,5), соответственно, (р=0,0004). Медиана продолжительности приема препаратов в 1 группе составила 1,5 года. В группе пациентов, принимающих АРВТ, в структуре патозооспермии преобладала тератозооспермия (40%), доля патологических форм сперматозоидов в данной группе было статистически значимо выше по сравнению со 2 группой (97 (96 -98) и 96 (94,5-96,5); р=0,006). В 1 группе пациентов установлена отрицательная взаимосвязь числа аномальных сперматозоидов и уровня CD4+ лимфоцитов (r=-0,362;р=0,026), длительностью заболевания (r=0,173;р=0,173) и концентрацией сперматозоидов (r=-0,242;р=0,020), числом прогрессивно–подвижных форм категории «в» (r=-0,241;р=0,024). Длительность АРВТ отрицательно коррелировала с числом прогрессивно–подвижных сперматозоидов категории «в» (r=-0,224;р=0,036).</p><p>Во 2 группе пациентов была выявлена статистически значимая положительная взаимосвязь между уровнем СД4+ лимфоцитов, объемом эякулята (r=0,778;p=0,014) и количеством прогрессивно–подвижных сперматозоидов категории «в»  (r=0,667;р=0,05). Также была обнаружена статистически значимая отрицательная взаимосвязь уровня вирусной нагрузки и объема эякулята (r =-0,669;р=0,035).</p><p>При оценке процента фрагментации ДНК сперматозоидов было выявлено, что данный показатель был выше у ВИЧ – инфицированных пациентов, принимающих АРВТ по сравнению с ВИЧ – положительными мужчинами, не использовавших терапию (15,8 % (12,4-23) и 14% (10,9-20,5); р=0,533).соответственно.</p><p>   Таким образом, у ВИЧ–инфицированных пациентов, принимающих АРВТ, наблюдается патозооспермия, а именно увеличивается число патологических форм сперматозоидов, снижается их подвижность и  повышается фрагментация ДНК сперматозоидов. Доля аномальных форм сперматозоидов выше при низких показателях СD4+ лимфоцитов. Концентрация сперматозоидов снижается, а количество их неподвижных форм увеличивается при длительном «стаже» ВИЧ-инфекции. У ВИЧ-положительных пациентов, не использующих АРВТ, при высоких уровнях вирусной нагрузки снижается объем эякулята и этот же параметр возрастает при увеличении уровня CD4+ лимфоцитов.</p></sec></trans-abstract><kwd-group xml:lang="ru"><kwd>вирус иммунодефицита человека (ВИЧ)</kwd><kwd>антиретровирусная терапия (АРВТ)</kwd><kwd>ДНК фрагментация</kwd><kwd>фертильность</kwd><kwd>бесплодие</kwd><kwd>спермограмма.</kwd></kwd-group></article-meta></front><back><ref-list><title>References</title><ref id="cit1"><label>1</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Краснопольская К.В, Назаренко Т.А., Гафуров Ю.Т. Место вспомогательных репродуктивных технология в реализации репродуктивной функции у ВИЧ-инфицированных Российский вестник акушера-гинеколога, 2013; 3: 47-55.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Краснопольская К.В, Назаренко Т.А., Гафуров Ю.Т. Место вспомогательных репродуктивных технология в реализации репродуктивной функции у ВИЧ-инфицированных Российский вестник акушера-гинеколога, 2013; 3: 47-55.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit2"><label>2</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Селимова Ф.Н., ПерминоваС.Г., Митюрина Е.В., и др. Реализация репродуктивной функции у мужчин с ВИЧ-инфекцией. 2018; 5:36-43;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Селимова Ф.Н., ПерминоваС.Г., Митюрина Е.В., и др. Реализация репродуктивной функции у мужчин с ВИЧ-инфекцией. 2018; 5:36-43;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit3"><label>3</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Vernazza P, Hirschel B, Bernasconi E, et al. HIV transmission under highly active antiretroviral therapy. Lancet 2008;372:1806–1807.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Vernazza P, Hirschel B, Bernasconi E, et al. HIV transmission under highly active antiretroviral therapy. Lancet 2008;372:1806–1807.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit4"><label>4</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Savasi V, Mandia L, Laoreti A, et al. Reproductive assistance in HIV serodiscordant couples Human Reproduction Update, 2013; 2: 136–150.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Savasi V, Mandia L, Laoreti A, et al. Reproductive assistance in HIV serodiscordant couples Human Reproduction Update, 2013; 2: 136–150.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit5"><label>5</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Nicopoullos JD, Almeida P, Vourliotis M, et al. A decade of the sperm-washing programme: correlation between markers of HIV and seminal parameters. HIV Med 2011;12:195–201;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Nicopoullos JD, Almeida P, Vourliotis M, et al. A decade of the sperm-washing programme: correlation between markers of HIV and seminal parameters. HIV Med 2011;12:195–201;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit6"><label>6</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Kehl, S., Weigel, M., Muller, D., et al. HIV-1 infection and modern antiretroviral therapy impair sperm quality. Archives Gynecology Obstetrics. 2011; 284, 229–233;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Kehl, S., Weigel, M., Muller, D., et al. HIV-1 infection and modern antiretroviral therapy impair sperm quality. Archives Gynecology Obstetrics. 2011; 284, 229–233;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit7"><label>7</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Drobnis E, Nangia K. Impacts of medications on male fertility. Advances in experimental medicine and biology 1034. 2017; 11:163-169;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Drobnis E, Nangia K. Impacts of medications on male fertility. Advances in experimental medicine and biology 1034. 2017; 11:163-169;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit8"><label>8</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Robbins WA, Witt KL, Haseman JK, et al. Antiretroviral therapy effects on genetic and morphologic end points in lymphocytes and sperm of men with human immunodeficiency virus infection. J Infect Dis 2001; 184:127–135;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Robbins WA, Witt KL, Haseman JK, et al. Antiretroviral therapy effects on genetic and morphologic end points in lymphocytes and sperm of men with human immunodeficiency virus infection. J Infect Dis 2001; 184:127–135;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit9"><label>9</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Garrido, N., Meseguer, M., Remohì, J., et al. Semen characteristics in Human Immunodeficiency Virus (HIV) and hepatitis C (HCV) seropositive males: Predictors of the success of viral removal after sperm washing. Human Reproduction. 2005; 20: 1028–1034;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Garrido, N., Meseguer, M., Remohì, J., et al. Semen characteristics in Human Immunodeficiency Virus (HIV) and hepatitis C (HCV) seropositive males: Predictors of the success of viral removal after sperm washing. Human Reproduction. 2005; 20: 1028–1034;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit10"><label>10</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Savasi V, Oneta M, Laoreti A, et al. Effects of Antiretroviral Therapy on Sperm DNA Integrity of HIV-1-Infected Men. American Journal of Men’s Health. 2018; 12(6):1824–1831;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Savasi V, Oneta M, Laoreti A, et al. Effects of Antiretroviral Therapy on Sperm DNA Integrity of HIV-1-Infected Men. American Journal of Men’s Health. 2018; 12(6):1824–1831;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit11"><label>11</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Evenson D. P. Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA): 30 years of experience with the SCSA. Biological and clinical applications in male infertility and assisted reproduction. 2011; 125–149;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Evenson D. P. Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA): 30 years of experience with the SCSA. Biological and clinical applications in male infertility and assisted reproduction. 2011; 125–149;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit12"><label>12</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Robinson L, Gallos ID, Conner SJ, et al. The effect of sperm DNA fragmentation on miscarriage rates: a systematic review and meta-analysis. Hum Reprod 2012; 27: 2908-17.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Robinson L, Gallos ID, Conner SJ, et al. The effect of sperm DNA fragmentation on miscarriage rates: a systematic review and meta-analysis. Hum Reprod 2012; 27: 2908-17.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit13"><label>13</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Lewis W., Dalakas M. C. Mitochondrial toxicity of antiviral drugs. Nature Medicine. 1995; 1: 417–422.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Lewis W., Dalakas M. C. Mitochondrial toxicity of antiviral drugs. Nature Medicine. 1995; 1: 417–422.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit14"><label>14</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Pavili L., Daudin M., Moinard N., et al. Decrease of mitochondrial DNA level in sperm from patients infected with human immunodeficiency virus-1 linked to nucleoside analogue reverse transcriptase inhibitors. Fertility and Sterility. 2010; 94: 2151–2156.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Pavili L., Daudin M., Moinard N., et al. Decrease of mitochondrial DNA level in sperm from patients infected with human immunodeficiency virus-1 linked to nucleoside analogue reverse transcriptase inhibitors. Fertility and Sterility. 2010; 94: 2151–2156.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit15"><label>15</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">White D. J., Mital D., Taylor S., et al. Sperm mitochondrial DNA deletions as a consequence of long term highly active antiretroviral therapy. AIDS. 2010; 15: 1061–1062.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">White D. J., Mital D., Taylor S., et al. Sperm mitochondrial DNA deletions as a consequence of long term highly active antiretroviral therapy. AIDS. 2010; 15: 1061–1062.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit16"><label>16</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека, Пятое издание, перевод с английского к.б.н. Макарова Н. П., Научный редактор д.б.н., проф. Л. Ф. Курило 2012;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека, Пятое издание, перевод с английского к.б.н. Макарова Н. П., Научный редактор д.б.н., проф. Л. Ф. Курило 2012;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit17"><label>17</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Muller CH, Coombs RW, Krieger JN. Effects of clinical stage and immunological status on semen analysis results in human immunodeficiency virus type 1-seropositive men. Andrologia. 1998;30(suppl 1):15–22;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Muller CH, Coombs RW, Krieger JN. Effects of clinical stage and immunological status on semen analysis results in human immunodeficiency virus type 1-seropositive men. Andrologia. 1998;30(suppl 1):15–22;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit18"><label>18</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Dulioust E, Du AL, Costagliola D, et al. Semen alterations in HIV-1-infected men. Hum Reprod. 2002;17: 2112–2118;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Dulioust E, Du AL, Costagliola D, et al. Semen alterations in HIV-1-infected men. Hum Reprod. 2002;17: 2112–2118;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit19"><label>19</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Nicopoullos JD, Almeida PA, Ramsay JW, et al. The effect of human immunodeficiency virus on sperm parameters and the outcome of intrauterine insemination following sperm washing. Hum Reprod. 2004;19:2289–2297;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Nicopoullos JD, Almeida PA, Ramsay JW, et al. The effect of human immunodeficiency virus on sperm parameters and the outcome of intrauterine insemination following sperm washing. Hum Reprod. 2004;19:2289–2297;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit20"><label>20</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Dondero F, Rossi T, D’Offizi G, et al. Semen analysis in HIV seropositive men and in subjects at high risk for HIV infection. Hum Reprod.1996;11:765–768;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Dondero F, Rossi T, D’Offizi G, et al. Semen analysis in HIV seropositive men and in subjects at high risk for HIV infection. Hum Reprod.1996;11:765–768;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit21"><label>21</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Bujan L, Pasquier C, Labeyrie E, et al. Insemination with isolated and virologically tested spermatozoa is a safe way for HIV-1 virus sero-discordant couples with an infected male partner to have a child. Fertil Steril 2004; 82: 857–862;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Bujan L, Pasquier C, Labeyrie E, et al. Insemination with isolated and virologically tested spermatozoa is a safe way for HIV-1 virus sero-discordant couples with an infected male partner to have a child. Fertil Steril 2004; 82: 857–862;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit22"><label>22</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Pilatz A, et al. Semen quality in HIV patients under stable antiretroviral therapy is impaired compared to WHO 2010 reference values and on sperm proteome level. AIDS. 2014;28(6):875–882;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Pilatz A, et al. Semen quality in HIV patients under stable antiretroviral therapy is impaired compared to WHO 2010 reference values and on sperm proteome level. AIDS. 2014;28(6):875–882;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit23"><label>23</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Van Leeuwen E, et al. Semen parameters of a semen donor before and after infection with human immunodeficiency virus type 1: case report. Hum Reprod. 2004;19(12):2845-2853;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Van Leeuwen E, et al. Semen parameters of a semen donor before and after infection with human immunodeficiency virus type 1: case report. Hum Reprod. 2004;19(12):2845-2853;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit24"><label>24</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Van Leeuwen E, et al. Semen quality remains stable during 96 weeks of untreated human immunodeficiency virus-1 infection. Fertil Steril. 2008;90(3):636–641;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Van Leeuwen E, et al. Semen quality remains stable during 96 weeks of untreated human immunodeficiency virus-1 infection. Fertil Steril. 2008;90(3):636–641;</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit25"><label>25</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Frainais C, Vialard F, Rougier N et al. Impact of freezing/thawing technique on sperm DNA integrity in HIV-1 patients. Assist Reprod Genet. 2010; 27(7): 415–421;</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Frainais C, Vialard F, Rougier N et al. Impact of freezing/thawing technique on sperm DNA integrity in HIV-1 patients. Assist Reprod Genet. 2010; 27(7): 415–421;</mixed-citation></citation-alternatives></ref></ref-list><fn-group><fn fn-type="conflict"><p>The authors declare that there are no conflicts of interest present.</p></fn></fn-group></back></article>
